用什么光源激發(fā)熒光蛋白?

LUYOR-3415RG熒光蛋白定位激發(fā)光源可與熒光蛋白觀察鏡luv-50A或 luv-60A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）或黃色熒光蛋白（YFP）。激發(fā)光源與觀察眼鏡LUV-50A共同使用，可在動物設(shè)備的固定位置如層流柜直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）。兩個握桿之間的空間可容納小動物的籠子（如小鼠）。LUYOR-3415RG激發(fā)光源使用鋰電池組供電，可與觀察鏡luv-50A 或 luv-60A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）或黃色熒光蛋白（YFP）。

綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)

 綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一類存在于腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白。GFP具有多種優(yōu)點：易于檢測，靈敏度高；熒光性質(zhì)穩(wěn)定，耐受性強(qiáng)；易于表達(dá)，無細(xì)胞毒性；可用于活細(xì)胞檢測。因此，GFP可作為報告基因用于檢測基因表達(dá)或調(diào)控，或作為融合標(biāo)簽來檢測蛋白質(zhì)分子的定位、遷移、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用，或者靶向標(biāo)記某些細(xì)胞器。

GFP吸收的光譜zui大峰值為395nm（紫外），并有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍(lán)光）；發(fā)射光譜zui大峰值為509nm（綠光），并帶有峰值為540nm的側(cè)峰（Shouder）。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發(fā)光對細(xì)胞的傷害更小，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）。此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似，兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定，在激發(fā)光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強(qiáng)，特別是在450～490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定。

類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高，抗光漂白能力強(qiáng)，因此更適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物，因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學(xué)放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。

觀察GFP熒光蛋白方法有：

1.便攜式GFP激發(fā)光源：

采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡）是zui便捷、zui方便的觀察方法，因GFP在470nm有一個很高的吸收峰，采用  470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光，在觀察gfp熒光時，因為激發(fā)光為強(qiáng)烈的藍(lán)色光線，必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。推薦使用美國路陽LUYOR-3415或LUYOR-3410便攜式激發(fā)光源。

上圖為采用便攜式GFP激發(fā)光源觀察到的效果

2. 紫外光源：

采用紫外光源（又叫紫外線燈、黑光燈）觀察也非常方便，但如果觀察植物，植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光，對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾，另外，標(biāo)本長時間在紫外光源照射下對GFP標(biāo)本組織也會造成破壞。

LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源可野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。通過定點觀察GFP，可有利于學(xué)習(xí)如何操縱和提高有用的染色體特性，從而可以篩選出高基因表達(dá)的植物。

 LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源的應(yīng)用：

1、 野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。
2、 應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物研究。
3、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體。
4、 用于基因表達(dá)的研究。
5、 用于Rhodamine（紅色熒光染料）、葉綠素、熒光素的研究。

以上部分內(nèi)容來自http://www.luyor.net/app/app202.html 

GFP觀察常見問題：

1.動物植物里面表達(dá)GFP如何觀察和拍照？

首先要選擇光線比較暗的環(huán)境，佩戴路陽LUV-90P觀察眼罩，采用美國路陽熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3410RB照射要觀察的植株，GFP表達(dá)位置即可清晰呈現(xiàn)。

2.觀察到的GFP表達(dá)位置如何拍照？

要拍照植物GFP表達(dá)的位置，首先要有一臺單反相機(jī)，安裝美國路陽LUV-520植物拍照濾鏡，美國路陽LUV-520濾鏡是62mm，如果您的單反相機(jī)鏡頭不是62mm，可在市場上購買濾鏡安裝轉(zhuǎn)換卡，也可直接找美國路陽中國服務(wù)中心免費索取，用LUYOR-3410RB熒光蛋白觀察鏡照射植物，用裝有LUV-520濾鏡的單反相機(jī)直接拍照就行了，切記要關(guān)閉照相機(jī)閃光功能。

3.紅色熒光蛋白如何觀察和拍照？

首先要選擇光線比較暗的環(huán)境，佩戴路陽LUV-50觀察眼罩，采用美國路陽便攜式熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3410GR照射要觀察的植株，GFP表達(dá)位置即可清晰呈現(xiàn)。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位？

4. 用LUYOR-3410RB便攜式熒光蛋白觀察鏡需要把植物葉片采下來觀察嗎？

LUYOR-3410RB便攜式熒光蛋白觀察鏡內(nèi)置有充電電池，即開即用，可以直接帶入到試驗田里面觀察， 無需采摘葉片，如果試驗田光線太亮，需要做隔光處理。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位？

5. LUV-520拍照濾鏡可以用于其他廠家的激發(fā)光源嗎？

凡是能激發(fā)GFP熒光的熒光蛋白觀察鏡， LUV-520拍照濾鏡均能夠滿足，可以單獨購買LUV-520拍照濾鏡。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位？

6.  365nm、450nm、488nm 用哪個波段zui好？

GFP和egfp用這幾個波段都能激發(fā)出熒光，365nm激發(fā)的比較弱，488nm激發(fā)的熒光zui強(qiáng)，但488nm的激發(fā)波長太接近發(fā)射波長520nm，激發(fā)光和發(fā)射光距離太近對觀察眼鏡要求太高，觀察眼鏡很難把發(fā)射光隔離掉，會嚴(yán)重干擾發(fā)射的熒光。所以用450nm的激發(fā)光是zui理想的。

7.  365nm的紫外光源照射植物葉片為什么是紅色和黃色？

365nm的紫外光源照射植物葉片，葉片的葉綠素在紫外線作用下會發(fā)紅光，GFP發(fā)出的是綠色的熒光，紅色和綠色混在一起，會變成黃色，，用紫外光源照射葉片上黃色部位有可能就是GFP表達(dá)的位置。

8.  為什么觀察眼鏡和拍照濾鏡價格這么貴？

因為這種眼鏡和濾鏡的鏡片對波段的截止要求特別高，不允有任何激發(fā)光通過，鏡片表面經(jīng)過了60多層涂層處理，制造工藝特別復(fù)雜。

9.  觀察眼鏡和拍照濾鏡如何保養(yǎng)？

觀察眼鏡和拍照濾鏡的鏡片經(jīng)過了60多層涂層處理，不用時請放置好，表面有灰塵請用柔軟的鏡頭布蘸中性洗滌劑擦洗.

10. LUYOR-3415rg熒光蛋白觀察鏡主要有哪些應(yīng)用？

1.檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）基因、紅色熒光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥等；
2.檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動物：小鼠、兔子、猴子等；
3.檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因微生物：細(xì)菌、真菌、酵母等；
4.檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達(dá)

11.在哪里可以買到美國路陽的便攜式熒光蛋白觀察鏡？

美國路陽在上海設(shè)立有中國客戶服務(wù)中心，提供路陽產(chǎn)品的銷售維修服務(wù)。上海、北京、鄭州均可免費上門演示，美國路陽對中國地區(qū)的客戶提供3年免費維修服務(wù)，中國地區(qū)免費請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系：4006-254-365

如何選擇熒光蛋白激發(fā)波長（GFP，F(xiàn)ITC，RFP ......）？

LUYOR提供五種不同的熒光蛋白激發(fā)波長光源，配有經(jīng)濟(jì)型體視顯微鏡熒光適配器和便攜式雙熒光蛋白激發(fā)光源。這些可用于激發(fā)多種熒光團(tuán)。此頁面提供有關(guān)為您的應(yīng)用選擇正確波長組的指導(dǎo)。
表 1列出了LUYOR波長組，包括激發(fā)范圍的zui強(qiáng)烈部分和成對發(fā)射濾光片的截止值。
表2  列出了我們推薦用于各種熒光蛋白和染料的波長組。如果您沒有在列表中看到您的熒光團(tuán)，請告訴我們，我們將添加它。如果您發(fā)現(xiàn)任何錯誤或可以根據(jù)您的個人經(jīng)驗驗證效果，請同時告訴我們。

我們的建議基于熒光團(tuán)的工作知識 - 我們自己或客戶的反饋 - 或已公布的光譜數(shù)據(jù)。

表一：熒光蛋白的波長組

熒光蛋白和熒光物質(zhì)的激發(fā)波長的選擇

我公司生產(chǎn)多款便攜式熒光蛋白激發(fā)光源，如希望提供更多詳細(xì)信息，可直接聯(lián)系上海路陽生物技術(shù)有限公司的銷售客服。.

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