美國(guó)NIGHTSEA專(zhuān)門(mén)致力于研究和開(kāi)發(fā)熒光觀測(cè)裝備。NIGHTSEA熒光觀測(cè)利器包括:SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器,DFP-1雙熒光蛋白手電筒系列,BLS2單熒光蛋白手電筒系列等。
小巧簡(jiǎn)便的熒光觀測(cè)裝置,應(yīng)用如下:
一 美國(guó)NIGHTSEA熒光觀測(cè)利器的應(yīng)用之——轉(zhuǎn)基因生物觀測(cè):如小鼠幼崽,果蠅幼蟲(chóng),線蟲(chóng),斑馬魚(yú),等等。
1. 觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生物——果蠅
觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生物——斑馬魚(yú)
3. 觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生物——爪蟾
4. 觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生物——線蟲(chóng)
5.觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生物——蠑螈
6.觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生物——擬南芥種子
美國(guó)NIGHTSEA熒光觀測(cè)利器的應(yīng)用之——樣本預(yù)篩選和輔助解剖
熒光是細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)及其它多個(gè)研究領(lǐng)域中一種強(qiáng)大和廣泛使用的工具。nightsea的DFP-1, BLS2和SFA-RB可以用于樣本的預(yù)篩選、輔助解剖等,下面列舉幾個(gè)實(shí)例:
1. 熒光蛋白標(biāo)記的工程病毒載體在神經(jīng)元功能研究中應(yīng)用十分廣泛,常通過(guò)顱內(nèi)注射研究特定腦區(qū)的功能。在此中,常需要對(duì)病毒表達(dá)區(qū)域進(jìn)行快速解剖用于特定的生化分析。為了提高快速解剖定位精準(zhǔn)度,研究人員選用了nightsea的BLS2 Bluestar手電筒觀測(cè)系列,通過(guò)配合nightsea濾光眼鏡準(zhǔn)確確定注射表達(dá)了熒光蛋白的伏核區(qū)(文獻(xiàn)– Xuan Li and Marina E. Wolf, 2011. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. J. of Neuroscience Methods, Vol. 201, Issue 1, pp. 177-179. LINK)
EGFP標(biāo)記的慢病毒質(zhì)粒注射進(jìn)小鼠大腦區(qū)域(Marina Wolf, Rosalind Franklin University)
2. 研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。這項(xiàng)困難的工作因有了NIGHTSEA的DFP-1或BLS2(手電筒和眼鏡組合),而變得簡(jiǎn)單:很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域,從而讓解剖更準(zhǔn)確、。
小鼠大腦中GFP標(biāo)記的背紋體(Charles Mazel. Sample photographed at laboratory of Stefano Vicini, Georgetown University)
3. 用DFP-1雙熒光蛋白手電筒,BLS2單熒光蛋白手電筒,或SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器,可以很快的檢測(cè)樣本是否成功染色(Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記),如下圖:
兔腰肌的肌纖維(用Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記)
左圖:白光觀測(cè) 右圖:Royal Blue熒光觀測(cè)(Motic SMZ-186體視顯微鏡觀測(cè))
4.用SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器以斑馬魚(yú)為模型,觀測(cè)不同有害化學(xué)物(醫(yī)藥、農(nóng)藥、食品添加劑等)對(duì)大腦發(fā)育的影響。觀測(cè)圖片如下:
基因斑馬魚(yú)大腦共聚焦圖像
Kaede protein–綠色是未改變的,紅色是發(fā)生改變的,圖片由Robert Thorn(Creton Lab, 布朗大學(xué))提供
5. 熒光是珊瑚采集研究的重要工具?,F(xiàn)在,可以用經(jīng)濟(jì)又實(shí)惠的SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器安裝到體視顯微鏡上檢測(cè)珊瑚。
下面的圖片是通過(guò)立體顯微鏡觀看珊瑚蟲(chóng),由UNCW威爾明頓納大學(xué)Alina Szmant 博士與NIGHTSEA Charles Mazel博士提供
6. 用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選
在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了高效同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個(gè)突變株,得到雙交換突變株的效率為25%-62.5%,從雙交換突變株得到無(wú)痕缺失突變株的效率為100%。通過(guò)gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用NightSea BlueStar藍(lán)光手電筒和濾光眼鏡,可以對(duì)平板上的基因缺失株直接進(jìn)行快速判定。
本研究采用nightsea BLS2 BlueStar 藍(lán)色手電筒和濾光鏡對(duì)平板上的結(jié)核分枝桿菌綠色熒光蛋白菌落進(jìn)行快速鑒定。該方法可以從幾百個(gè)菌落中瞬間鎖定陽(yáng)性克隆。平板上的菌落照片拍攝用單反相機(jī)加載購(gòu)自nightsea公司的濾光片實(shí)現(xiàn)。
圖片源自[結(jié)核分枝桿菌同源重組基因敲除系統(tǒng)的構(gòu)建和應(yīng)用]
Good News標(biāo)準(zhǔn)的DFP-1雙熒光蛋白觀測(cè)鏡,只有RB-Royal Blue和GR-Green兩種熒光激發(fā)裝置,也就是說(shuō)標(biāo)準(zhǔn)的DFP-1只能用于觀測(cè)綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白。
現(xiàn)在,您可以選擇以下任何兩種熒光裝置,組裝成您專(zhuān)屬的雙熒光蛋白手電筒啦。
熒光裝置型號(hào) | Excitation激發(fā)光 | Emission發(fā)射光 | 可觀測(cè)熒光 |
RB-Royal Blue | 440-460nm | 500nm LP | GFP, eGFP, fluorescein.... |
CY-Cyan | 490-515nm | 550nm LP | YFP, Venus, Lucifer Yellow... |
GR-Green | 510-540nm | 600nm LP | DsRed, dTomato... |
VI-Violet | 400-415nm | 460nm LP | CFP, BFP... |
UV-Ultra Violet | 360-380nm | 415nm LP | DAPI |
注:
1.RB-Royal Blue用于觀測(cè)綠色熒光蛋白
GFP:綠色熒光;EGFP:增強(qiáng)型綠色熒光;fluorescein熒光素
2.CY-Cyan用于觀測(cè)黃色熒光蛋白
YFP:黃色熒光蛋白;Venus:金色;Lucifer Yellow:熒光黃
3.GR-Green用于觀測(cè)紅色熒光蛋白
DsRed:紅色熒光蛋白;dTomato:番茄紅
4.VI-Violet用于觀測(cè)紫色熒光蛋白
CFP:青色熒光蛋白;BFP:堿性胎兒蛋白
5.UV-Ultra Violet用于觀測(cè)紫外光
DAPI:藍(lán)色熒光