GFP標(biāo)記到表達(dá)的煙草葉片為什么有紅色熒光?
經(jīng)常有同學(xué)咨詢,我用LUYOR-3415RG GFP便攜式雙波長(zhǎng)熒光蛋白激發(fā)光源觀察GFP才煙草葉片的表達(dá),為什么會(huì)有紅色熒光,有的是整片葉片都是紅色熒光,有的有綠色熒光表達(dá),也有紅色熒光,究竟是什么原因,現(xiàn)在,我們給大家解釋說明一下:
因?yàn)椋瑹煵萑~片含有大量的葉綠素,葉綠素在藍(lán)色波段照射時(shí)候,會(huì)發(fā)出紅色熒光。具體葉綠素的激發(fā)光和發(fā)射光的光譜圖如下:
由上圖可以看出,葉綠素a和葉綠素b的激發(fā)波段400-500nm。主峰在460nm,屬于藍(lán)光,發(fā)射波段為620-680nm,屬于紅光波段。
所以,如果用LUYOR-3415RG照射煙草葉片,如果葉片沒有表達(dá)GFP或者GFP表達(dá)量太低,會(huì)看到整個(gè)葉片都是紅色。如果葉片上有很高的GFP表達(dá),在葉片表達(dá)的位置會(huì)有綠色熒光。見下圖:
如果您不希望看到葉綠素紅色熒光,您可以選擇LUV-30AG綠色觀察眼鏡,這款熒光蛋白觀察眼鏡采用帶通隔離,能夠隔離500nm以下和580nm以上的波段,這樣就看不到葉綠素的紅色熒光。拍照可以選擇LUV-520A拍照濾鏡,這款拍照濾鏡,也是采用帶通濾光片,有效隔離掉了葉綠素的紅色熒光,您可以參考閱讀《如果選購(gòu)熒光蛋白拍照濾鏡 》LUV-30AG和luv-520a的觀察、拍照效果如下:
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